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人ELISA試劑盒檢測關于特異性顯色詳細
更新時間:2013-12-23   點擊次數:1570次

  酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)自問世以來,以其敏感性高,特異性強,操作簡便、安全,開創(chuàng)了免疫學診斷的新紀元在臨床診斷方面得到了廣泛的應用。但是人ELISA試劑盒在它的研究、生產及使用中常常會碰到非特異性顯色問題,ELISA試劑盒特異性、檢驗標本中含酶標記物的干擾物,操作不當等因素都會導致這樣的結果。本文就在實驗過程中產生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特異性顯色作以分析。
  風濕因子(RF)、黃疸等,類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體,多數為IgM類,能充當抗原成分與固相及酶標抗體反應,從而呈現(xiàn)非特異性顯色。
黃疸血標本中常含有內源性過氧化物酶,如用辣根過氧化物酶為標記物,就有可能產生非特異性顯色。
    常因樣品采集、貯存、處理不當造成如樣品溶血,被細菌污染,標本凝集不全等。溶血標本,紅細胞溶解破裂,釋放出血紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP(辣根過氧化酶),有國內報道酶免HBsAg試劑檢測溶血標本時可造成假陽性。如在冰箱中保存過久,其中的IgG可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。因此,血標本在采集處理時應小心,在冰箱中保存不易過久。

標本凝集不全時,血清中會殘留部分纖維蛋白原,也易造成假陽性。
  對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋,如果加樣不準就會造成誤差,尤其當稀釋倍數大時,很小的誤差,會導致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標本,可較好地避免以上誤差。
    在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步,應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作,得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關,ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。
    每種試劑都有其*反應模式,其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應時間長,會造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,人ELISA試劑盒反應板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應加蓋。
    作為記錄測定結果的儀器,酶標儀的性能穩(wěn)定與否,決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進行保養(yǎng),對濾光片要定期校正;其次酶標儀波長設置要正確,使用雙波長,一個檢測波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同,使用中應詳細閱讀說明書
綜上所述,盡管目前上以及我國有了部分標準血清或參比血清(血清盤),但是酶聯(lián)免疫吸附技術目前在技術上尚未做到標準化。受方法學及技術條件的限制,在酶聯(lián)免疫吸附測定中有時不可避免的會出現(xiàn)一定的非特異性,人ELISA試劑盒我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至zui低限底,從而提高檢測的特異性,并得到更準確、可靠的實驗結果。

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